ОБЩА ИНФОРМАЦИЯ

Интерферон гама (IFN-γ) е цитокин, критичен както за вродения, така и за адаптивния имунитет, и функционира като основен активатор на макрофагите, в допълнение към стимулирането на естествените клетки убийци и неутрофилите. Т-лимфоцитите от повечето хора, които са били заразени с SARS-CoV-2, освобождават интерферон гама (IFN-γ), когато се срещнат с антигени на SARS-CoV-2.

WANTAI SARS-CoV-2 IGRA е ензимно-свързан имуносорбентен тест (ELISA) за количествено откриване на интерферон гама (IFN-γ), който реагира на in vitro стимулация чрез спайк протеина на SARS-CoV-2 в цяла кръв. Предназначен е за използване като помощно средство при диагностицирането на специфичен Т-клетъчен имунен отговор на SARS-CoV-2 спайк протеина след ваксинация или инфекция. Този кит не е препоръчително да се използва като единствената основа за клинична диагноза.

ПРИНЦИП НА ТЕСТА

Този кит използва принципа на IGRA, комбиниран с ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за измерване на специфична антиген-медиирана сила на имунния отговор. Специфични Т-лимфоцити на SARS-CoV-2 след ваксинация се стимулират и пролиферират от SARS-CoV-2 специфичен антиген (спайк протеин), след което се освобождава гама интерферон (IFN-γ).

Микроямките са предварително покрити с миши анти-човешки IFN-y IgG моноклонални антитела. По време на първия етап на инкубация, ако присъства IFN-y, ще се свърже с предварително покритото с твърда фаза анти-IFN-y антитяло, след което се добавят анти-IFN-y антитяло, конюгирано с хрянова пероксидаза (HRP). По време на втория етап на инкубация, тези HRP-конюгирани антитела ще се свържат с всеки комплекс, образуван преди това и несвързаният HRP-конюгат или несвързани протеини след това се отстраняват чрез промиване. Към ямките се добавят разтвори на хромоген, съдържащи тетраметил бензидин (TMB) и карбамиден пероксид. В присъствието на имунокомплекс, безцветните хромогени се хидролизират от свързания HRP конюгат до синьо оцветен продукт. Синият цвят става жълт след спиране на реакцията със сярна киселина. Ямките, които не съдържат IFN-γ, остават безцветни.

Количеството интензивност на цвета може да бъде измерено и е пропорционално на количеството IFN-γ, уловено в ямките, и съответно на пробата. Концентрацията на IFN-y може да бъде изчислена чрез стандартна стойност на концентрация и абсорбция (стойност A), за да се определи съществуването на Т клетъчен имунен отговор към SARS-CoV-2.

МАТЕРИАЛИ И РЕАГЕНТИ

• Микротитърна плака
• Отрицателна контрола (N)
• Тест епруветка (T)
• Положителна контрола (P)
• Стандарт
• HRP - Конюгат
• Разредител за проби
• Стандартен разредител
• Измивен буфер
• Хромогенен разтвор А
• Хромогенен разтвор Б
• Стоп разтвор
• Запечатваща торба
• Инструкция

ЕФЕКТИВНОСТ

Група от 129 ваксинирани индивида бяха тествани с този комплект, 14 тествани отрицателно и 115 тествани положително, което изчислява чувствителността от 89,15%. В група от 91 неваксинирани и неинфектирани лица, 90 тествани отрицателно, 1 тествано положително (фалшиво положително), което изчислява специфичност от 98,90%.

Първият CE-IVD сертифициран SARS-CoV-2 тест за количествено измерване нивата на интерферон гама по метода ELISA